蛋白纯化服务-蛋白纯化原理

美迪西生物医药在重组蛋白表达与纯化服务方面有10余年经验积累，拥有多种蛋白表达系统。

你咨询下南京德泰生物，上个月在那做了几个蛋白，优先提供的上清表达的蛋白，实验的活性比预期的还好些

蛋白纯化员和蛋白纯化分析员有什么区别

蛋白纯化只是一门技术，设计的方面还是偏技术，与市场联系不紧密，而且专业做的公司极少，应用型不如体外诊断。

诊断试剂开发更多是工程工艺方面，这方面做的公司很多。

至于发展你好坏，做技术的人，还是靠技术的实力，如果是市场，那就是自己的市场敏锐度了，

1生物制药企业：如做蛋白产品的纯化各种疫苗的纯化等可以做技术也可以做销售等

2科研机构：如各个地方的生物所等

3服务外包型公司：专门提供蛋白、疫苗等纯化服务（包括工艺和产品）

4生产蛋白纯化介质的公司：这样的企业一般要对生产的介质进行性能等的检测和验证

5如果有资金和项目的话自己创业也是不错的选择

6当然不仅仅局限于以上所述的工作方式还要看自己的兴趣和爱好不排除从事其他的行业跨行工作成功的案例也不在少数

冷泉港蛋白纯化手册类似的很多可以下到电子版

伯乐生命医学的蛋白质纯化仪系统，这款系统真的蛮不错的，我们多方比较下来都是最好的。符合你的要求的。

主要有：

等电聚焦：使电泳的介质中形成一定范围的pH梯度，电泳时待分离的两性分子可以在这种pH梯度中迁移，直到聚集于与其等电点相同的区域。该技术特别适用于分子量相近而等电点不同的蛋白质分离和分析。

等电点沉淀：利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同两性电解质等电点不同的特性，通过调节溶液PH，使蛋白质或杂志沉淀析出，从而使蛋白质与杂质分离。

层析聚焦：将蛋白质等两性电解质的等电点的特性和层析的特性结合在一起，实现分离的技术。

等电点结晶：通过缓慢改变蛋白质溶液的PH，使之逐渐达到等电点，而使蛋白质结晶析出，从而得到纯化。

Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。

步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环挂柱，就是恒流泵的一头接你装蛋白的烧杯，从柱子中留下来的液体还用同一个烧杯接回去。

挂完之后，按理想来讲，你的蛋白在Ni柱中与Ni就结合了，杂蛋白多数在烧杯里，留下来了，当然肯定有少量杂蛋白也挂上了，这时候你要梯度洗脱，拿咪唑和你的配，一般从020mM40mM。100mM这样洗脱（当你不知道你的蛋白大概在什么时候出来的时候）我指的是咪唑的终浓度。

咪唑加入之后，会和蛋白争夺与Ni的结合位点，杂蛋白、你的目的蛋白，会在不同的浓度被洗脱下来，洗完之后，你可以用200mM咪唑洗柱子，清理一切蛋白，然后平衡几次，是否选择重生你自己定咯然后放上20乙醇保存柱子就可以咯。

过的蛋白用不同的管子收下，然后检测在哪个管子里。

这是我的经验，楼主可以多方面参考下别人的。喜欢推荐我的答案哦，≧▽≦